本技術涉及用于癌癥檢測的方法。特別地，本技術涉及t細胞接合器（tce）。

背景技術：

1、t細胞的細胞毒性性質使其在癌癥治療中很有價值。已設計多種策略來利用t細胞治療癌癥，諸如t細胞接合器（tce）、嵌合抗原受體（car）t細胞、tcr-t細胞等。尤其是tce，已被證明具有高效力：在皮摩爾劑量下可誘導細胞毒性，并且可觀察到強烈的t細胞活化。首個抗cd3/cd19?tce——博納吐單抗（amgen，blincyto?），于2014年被批準用于治療急性淋巴細胞白血病。多項研究已證明，tce誘導t細胞活化，顯示為cd25和cd69的上調以及細胞因子如il-2、tnf-α和ifn-γ的分泌。最近，一種新型gp100肽-hla?tcr/抗cd3融合蛋白替本福司（immunocore，kimmtrak?）于2022年被批準用于治療轉移性葡萄膜黑色素瘤。tce的批準表明了對更有效的免疫療法的需求。然而，盡管tce是一種強效細胞毒性劑，但對tce刺激t細胞的長期效果知之甚少，并且沒有證據表明其對癌癥復發具有長期保護作用。

技術實現思路

1、以下
技術實現要素：
僅是說明性的，并不旨在以任何方式進行限制。除上述說明性方面、實施方案和特征之外，通過參考附圖和以下詳細描述，其他方面、實施方案和特征將變得顯而易見。

2、本技術尤其提供了用于評價t細胞接合器（tce）的功效或安全性的測定系統、裝置、方法和工藝。本技術還提供了生物復合物和組合物。

3、在一方面，本技術提供了用于評價t細胞接合器（tce）的功效和安全性的測定系統。在一個實施方案中，測定系統包括細胞培養板，該細胞培養板具有至少一個腔室，用于在細胞培養基中接種多個表達至少一種癌癥標志物的細胞。密度可以為每個腔室每cm2至少30,000、40,000、50,000或100,000個細胞。這些細胞附著于細胞培養板的表面。

4、細胞培養基包含多個t細胞和一種tce。在一個實施方案中，t細胞的數量可以不超過所接種的癌細胞數量的三分之二（?）。tce的濃度可以為每ml細胞培養基至少1?ng。tce可以具有對癌癥標志物的第一結合特異性和對t細胞的第二結合特異性。

5、在一個實施方案中，可以測量t細胞附著于或脫離表達至少一種癌癥標志物的細胞的速率。

6、在一個實施方案中，測定系統包括第一細胞培養板，該第一細胞培養板具有至少一個腔室，用于在第一細胞培養基中接種多個表達至少一種癌癥標志物的細胞。密度可以為每個腔室每cm2至少30,000、50,000或100,000個細胞。這些細胞可以附著于第一細胞培養板的表面。

7、在一個實施方案中，第一細胞培養基包含多個t細胞和一種tce。t細胞的數量可以為所接種的癌細胞數量的約4倍、5倍或6倍。tce的濃度可以為每ml第一細胞培養基至少1ng。tce可以具有對癌癥標志物的第一結合特異性和對t細胞的第二結合特異性。將表達至少一種癌癥標志物的細胞、t細胞和tce共培養一段共培養期，以提供活化t細胞。

8、在一個實施方案中，tce可以被配置為結合t細胞和表達至少一種癌癥標志物的細胞，以提供生物復合物，從而活化t細胞、殺死表達至少一種癌癥標志物的細胞，并使表達至少一種癌癥標志物的細胞從第一細胞培養板脫離。在一個實施方案中，包含t細胞的生物復合物可以因表達至少一種癌癥標志物的細胞的附著而最初附著于第一細胞培養板。然后，通過殺死表達至少一種癌癥標志物的細胞，活化t細胞從第一培養板脫離并釋放到第一細胞培養基中。因此，在一個實施方案中，第一細胞培養基可以包含通過殺死表達至少一種癌癥標志物的細胞而從第一細胞培養板脫離的活化t細胞。

9、測定系統還包括第二細胞培養板，用于測量活化t細胞的生長速率。在一個實施方案中，第二細胞培養板包含第二細胞培養基。在一個實施方案中，將活化t細胞從第一細胞培養基中取出，并在第二細胞培養基中培養一段擴增培養期，以提供擴增的活化t細胞。在一個實施方案中，生長速率通過用熒光染料預標記t細胞并通過測量例如熒光對擴增的活化t細胞數量進行計數來測量。

10、測定系統還可以包括第三細胞培養板，用于測量活化t細胞的細胞毒性。在一個實施方案中，第三細胞培養板包含在第三細胞培養基中的表達至少一種癌癥標志物的細胞。在一個實施方案中，將活化t細胞從第一細胞培養基或第二細胞培養基中取出，并與表達至少一種癌癥標志物的細胞在第三細胞培養基中共生長一段共生長期。在一個實施方案中，活化t細胞的細胞毒性通過對表達至少一種癌癥標志物的細胞的細胞死亡進行計數來測量。

11、在一個實施方案中，共培養期為約半天至約2天。

12、在一個實施方案中，擴增培養期為約2天至約7天。

13、在一個實施方案中，共生長期為約半天至約1天。

14、在一個實施方案中，表達癌癥標志物的細胞包括癌細胞。在一個實施方案中，癌癥標志物包括cdh17。在一個實施方案中，癌細胞包括胃腸道癌細胞、胃癌細胞、結直腸癌細胞、食管癌細胞、胰腺癌細胞、肝膽癌細胞、小細胞肺癌細胞、卵巢癌細胞、膀胱癌細胞、神經內分泌腫瘤細胞、腺瘤癌細胞或其組合。

15、在一個實施方案中，t細胞包括來源于外周血單核細胞的t淋巴細胞、細胞毒性t細胞、輔助t細胞、自然殺傷t細胞或其組合。在一個實施方案中，t細胞表達cd3。

16、在一個實施方案中，tce包括雙特異性抗體或多特異性抗體。在一個實施方案中，雙特異性抗體對cd3和cdh17具有結合特異性。

17、在另一方面，本技術提供了生物復合物。在一個實施方案中，生物復合物本質上包含免疫突觸。在一個實施方案中，生物復合物包含與t細胞和表達至少一種癌癥標志物的細胞結合的tce。在一個實施方案中，生物復合物包含與t細胞結合的tce。在一個實施方案中，生物復合物包含與表達至少一種癌癥標志物的細胞結合的tce。

18、在一個實施方案中，生物復合物包含與t細胞和癌細胞結合的tce，并且該癌細胞是胃腸道（gi）癌細胞。

19、在又一方面，本技術提供了用于評價t細胞接合器（tce）的功效的方法。在一個實施方案中，本技術提供了以下步驟：將多個表達至少一種癌癥標志物的細胞附著于細胞培養板，將多個t細胞引入細胞培養基中，以及將tce引入細胞培養基中。在一個實施方案中，tce具有針對癌癥標志物的第一結合特異性和針對t細胞的第二結合特異性，因此tce被配置為結合t細胞和表達至少一種癌癥標志物的細胞。

20、該方法還包括測量t細胞附著于或脫離表達至少一種癌癥標志物的細胞的速率，或者測量t細胞附著于或脫離細胞培養板的速率。

21、在另一個實施方案中，本技術提供了以下步驟：將多個表達至少一種癌癥標志物的細胞附著于第一細胞培養板，并在第一細胞培養基中培養細胞一段細胞培養期，將多個t細胞引入第一細胞培養基中，以及將tce引入第一細胞培養基中。在一個實施方案中，tce具有針對癌癥標志物的第一結合特異性和針對t細胞的第二結合特異性，因此tce被配置為結合t細胞和表達至少一種癌癥標志物的細胞。

22、該方法還包括以下步驟：共培養通過tce與附著于第一細胞培養板的表達至少一種癌癥標志物的細胞結合的t細胞。在這種狀態下，t細胞可以通過表達至少一種癌癥標志物的板結合細胞附著于第一細胞培養板。

23、在一個實施方案中，該方法還包括以下步驟：收集從第一細胞培養板脫離的活化t細胞（因此懸浮于第一細胞培養基上清液中），并使該活化t細胞在包含第二細胞培養基的第二細胞培養板中生長一段擴增培養期，以提供擴增的活化t細胞，用熒光染料預標記t細胞，以及對擴增的活化t細胞數量進行計數，以提供t細胞的生長速率。

24、在一個實施方案中，該方法還包括以下步驟：使活化t細胞在包含表達至少一種癌癥標志物的細胞的第三細胞培養板中生長一段共生長期；以及通過對表達至少一種癌癥標志物的細胞的細胞死亡進行計數來測量活化t細胞的細胞毒性。

25、在一個實施方案中，tce是雙特異性抗體。在一個實施方案中，表達癌癥標志物的細胞是癌細胞。